Principe de la cytométrie en flux
La cytométrie en flux est une technique rapide et précise qui permet de caractériser individuellement des cellules ou particules en suspension et de les regrouper en une ou plusieurs sous-populations selon différents critères (taille, granularité, expression de protéines membranaires ou intracellulaires…). Elle permet également la séparation physique de ces différentes sous-populations (tri cellulaire) à partir d’une population hétérogène.
Présentation de la plateforme
La plateforme de tri cellulaire et cytométrie en flux du CHU de Clermont-Ferrand est installée au rez-de-chaussée du CHU Estaing, au sein du service d’Hématologie biologique. Elle est accessible du lundi au vendredi de 8h30 à 16h30 (et jusqu’à 18h pour les utilisateurs autonomes formés), à tous les services hospitaliers et toutes les équipes de recherche (secteur public ou privé) qui en feront la demande. Elle peut prendre en charge l’intégralité de la préparation des échantillons, de la mise au point technique et de l’analyse des données ou permettre l’utilisation en autonomie de certains équipements après une période de formation.
Le fonctionnement de la plateforme est régi par une charte d’utilisation qui devra être signée avant le début du projet.
Équipements disponibles
La plateforme est équipée d’automates permettant l’identification et l’analyse phénotypique et/ou fonctionnelle ainsi que le tri de différentes sous-populations cellulaires.
Analyseur BD LSRFortessa X-20 (Becton Dickinson) qui permet d’analyser simultanément 2 paramètres de morphologie (taille et granularité) ainsi que 14 paramètres de fluorescence.
| Laser | Filtre Primaire | Filtre Secondaire |
| Blue (488nm) | 780/60 | 750 LP |
| 710/50 | 685 LP | |
| 610/20 | 600 LP | |
| 575/25 | 550 LP | |
| 530/30 | 505 LP | |
| Red (640nm) | 780/60 | 750 LP |
| 730/45 | 690 LP | |
| 670/30 | / |
| Laser | Filtre Primaire | Filtre Secondaire |
| Violet (405nm) | 780/60 | 750 LP |
| 710/50 | 685 LP | |
| 670/30 | 635 LP | |
| 610/60 | 610 LP | |
| 525/50 | 505 LP | |
| 450/50 | / |
BD LSRFortessa X-20, configuration optique
Analyseur/trieur BD FACSAria SORP (Becton Dickinson) capable d’analyser simultanément 2 paramètres de morphologie et 18 paramètres de fluorescence. Cet instrument permet également de trier jusqu’à 4 sous-populations différentes, en tube ou sur plaque, en mode classique ou single cell.
| Laser | Filtre Primaire | Filtre Secondaire |
| Yellow-Green (561nm) |
780/60 |
750LP |
| 710/50 | 685LP | |
| 670/30 | 635LP | |
| 610/20 | 600LP | |
| 582/15 | / | |
| Red (633nm) | 780/60 | 750LP |
| 730/45 | 690LP | |
| 670/30 | / | |
| UV (355nm) | 530/30 | 505LP |
| 450/50 | / |
| Laser | Filtre Primaire | Filtre Secondaire |
|
Violet |
780/60 |
750LP |
| 710/50 | 670LP | |
| 670/30 | 630LP | |
| 610/20 | 595LP | |
| 525/50 | 505LP | |
| 450/50 | / | |
| Blue (488nm) | 695/40 | 685LP |
| 530/30 | 505LP |
BD FACSAria SORP, configuration optique
La plateforme est également équipée de stations de retraitement des données avec les logiciels FACSDiva 9.0 (Becton Dickinson) ou FlowJo 10.8 (FlowJo, LLC).
Services proposés
- Analyse cellulaire multiparamétrique (identification et analyse phénotypique et/ou fonctionnelle de différentes sous-populations cellulaires).
- Tri cellulaire multiparamétrique haute vitesse.
- Aide pour l’exploitation et l’analyse des données de cytométrie.
- Expertise dans le design des panels et la conception des expériences.
Contact
Service d’Hématologie biologique, site Estaing
1 place Lucie et Raymond Aubrac, 63003 Clermont-Ferrand
Téléphone : 04 73 75 02 04
Mail : plateforme-cmf@chu-clermontferrand.fr
Responsable
Dr Joévin Besombes | jbesombes@chu-clermontferrand.fr
Ingénieur
Dr Céline Bourgne | cbourgne@chu-clermontferrand.fr
Les nouveaux utilisateurs doivent prendre rendez-vous auprès du responsable et/ou de l’ingénieur pour discuter de la faisabilité du projet et de l’implication de la plateforme. Lors de ce premier rendez-vous, les futurs utilisateurs seront invités à présenter le contexte et les objectifs de l’étude.
