Analyse Protéomique en multiplex avec la technologie Luminex®, Ella® et Meso Scale Discovery®

Présentation

La plateforme BIOPRO-PLEX du service de Biochimie et Génétique Moléculaire se situe au 1er étage du Centre de Biologie du CHU Gabriel Montpied. Elle est sous la responsabilité du Pr Vincent Sapin.

Elle est équipée d’un appareil Bio-Plex 200 basé sur la technologie Luminex ; d’un appareil ELLA basé sur la technologie Simple Plex (nano-réacteurs capillaires) et d’un appareil MESO QuickPlex SQ 120 basé sur la technologie de détection par électro-chimie-luminescence en multiplex. La plateforme met à disposition tout le matériel nécessaire à la réalisation de dosages complets en Luminex, ELLA et Meso Scale Discovery suivants les protocoles des différents fournisseurs.

Le personnel de la plateforme a été formé pour travailler sur ces trois technologies et acquérir une expertise technique et analytique sur ces trois systèmes (pour différents types de matrice d’échantillons comme le plasma, le sérum, le LCS, des milieux de culture cellulaire ou des extraits cellulaires par exemple). Depuis la création de la plateforme en 2012, plus de 150 protocoles de dosage ont été réalisés. Les automates Bio-Plex 200 et Meso QuickPlex SQ 120 peuvent être utilisés par des membres extérieurs à la plateforme après formation. En revanche, seul le personnel de la plateforme est habilité à manipuler sur ELLA.

BIO PLEX 200

ELLA

  

MESO Quickplex SQ120

Principe de la technologie Luminex®

La technologie Luminex est une technologie récente fondée sur le principe d'un ELISA combiné à la cytométrie en flux (Bioplex 200), permettant le dosage simultané de nombreuses cibles protéiques ou nucléiques. Elle permet grâce à la technologie xMAP de Luminex, de détecter et de quantifier à partir de 25 µl d’échantillon jusqu’à 100 analytes différents (sous réserve de la comptabilité du mélange des anticorps ou sondes au sein du même échantillon).

Ce système peut s’appliquer à plusieurs natures d’échantillons (plasma, sérum, lysat tissulaire, surnageant de culture, sécrétions...) provenant de plusieurs espèces (homme, souris, rat, singe, chien, chat, porc…) en fonction de la disponibilité commerciale des réactifs.

Elle repose sur des particules magnétiques microscopiques fluorescentes servant à la détection simultanée de réactions biochimiques, qui sont analysées individuellement à partir de d'échantillons en format microplaques de 96 puits.

Cette technologie est qualifiée pour le dosage :

  • de protéines plasmatiques, urinaires, sériques ou du LCS
  • de cytokines
  • de chimiokines
  • de facteurs de croissance
  • de marqueurs métaboliques, cardiaques ou cancéreux
  • de l'analyse d'expression de phosphoprotéines et d'ARN…

Principe de la technologie Simple Plex - ELLA®

ELLA permet de réaliser des essais immunologiques dans une cartouche microfluidique Simple Plex où tout est pré-chargé (de la gamme d’étalonnage aux réactifs). La partie « immuno-analyse » fonctionne comme suit : l'échantillon passe par un canal micro-fluidique qui se lie à l’anticorps de la protéine d’intérêt. Le système ajoute ensuite un réactif de détection (marqueur fluorescent). Comme chaque canal comporte trois nano réacteurs en verre (GNR) recouverts d'un anticorps de capture, cela permet de générer une valeur moyenne issue d’une triple mesure pour chaque échantillon. Les concentrations sont calculées à partir de la courbe standard calibrée en usine qui est fournie avec chaque cartouche.

Principe de la technologie Meso Scale Discovery®

Meso Scale Discovery utilise l’électroluminescence, pour détecter les évènements de liaison sur des réseaux de micro-dépôts brevetés. Il n’existe aucune autre technologie permettant la mesure en multiplex par électro-chimie-luminescence (ECL) pour la détection.

Cette détection par ECL utilise le marquage par SULFO-TAGTM, qui émet de la lumière suite à une stimulation électrique initiée par les électrodes de surface des plaques MULTI-ARRAY® et MULTI-SPOT® grâce aux interactions biomoléculaires entre les analytes et la molécule de détection à la surface.

La lecture se fait par une caméra CCD réfrigérée de qualité scientifique et un assemblage de lentilles de précision sur mesure.
L’instrument MESO QuickPlex SQ 120 peut lire une plaque en 1 à 3,5 minutes quel que soit le niveau de multiplexing.
Il s’agit d’un système très fiable sans système fluidique, toutes les étapes de traitement et de lecture se font dans les formats de plaques MSD. Aucun échantillon n’est transféré depuis la plaque dans l’instrument, il n’y a donc aucun système complexe de fluidique, qui sont sujet à se boucher, ou tous autres problèmes.

Quelle technologie choisir ?

  Sensibilité Multiplexage Nombre d'analytes disponibles Coût

Luminex ®

+ +++ +++ ++

Simple Plex – ELLA ®

++ ++ + ++

Meso Scale Discovery ®

+++ ++ +++ ++

Services proposés

Luminex et Meso Scale Discovery

 

  • Formule 1 : Assistance au démarrage et prise en main de l’automate par un référent du service de Biochimie uniquement - Formation à l’automate pour une utilisation autonome.
  • Formule 2 : Réalisation de l’intégralité des dosages par une personne du service de Biochimie en collaboration ou non. Les résultats sont transmis par e-mail à l’utilisateur sous forme de fichier Excel®
 

Simple Plex

Réalisation de l’intégralité des dosages par une personne du service de Biochimie. Les résultats sont transmis par e-mail à l’utilisateur sous forme de fichier Excel®

Contact (pour information, établissement d’un devis)

Madame Julie Durif
Mail : j_durif@chu-clermontferrand.fr
Téléphones : 04 73 75 40 86 / 04 73 75 45 77

CHU Clermont-Ferrand, Site Gabriel-Montpied
Centre de Biologie, 1er étage
58 rue Montalembert, 63000 Clermont-Ferrand